从蛹虫草中连续提取虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖的工艺

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利

*CN101580755B*

(21)申请号 200910043666.4

(22)申请日 2009.06.11

(73)专利权人 湖南农业大学

地址 410128 湖南省长沙市芙蓉区人民东路

(72)发明人 刘东波

(74)专利代理机构 长沙星耀专利事务所 43205

代理人 赵静华

(10)授权公告号 CN 101580755 B

(45)授权公告日 2011.11.16

A61P 29/00 (2006.01)

A61P 37/04 (2006.01)

A61P 35/02 (2006.01)

A61P 3/10 (2006.01)

A61P 9/10 (2006.01)

A61P 7/02 (2006.01)

A61P 7/04 (2006.01)

A61K 36/066 (2006.01)

(51)Int.Cl.审查员孔倩

C11B 1/10 (2006.01)

C07H 19/16 (2006.01)

C07C 31/26 (2006.01)

C08B 37/00 (2006.01)

A61P 35/00 (2006.01)

A61P 31/12 (2006.01)

A61P 31/04 (2006.01)

(54) 发明名称

从蛹虫草中连续提取虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖的工艺

(57) 摘要

本发明公开了一种从蛹虫草中连续提取虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖的工艺。是将过 40 ～ 60 目筛的蛹虫草菌丝体粉加入到超临界 CO2流体萃取仪中 ；在压力 15-25MPa，温度 35-40℃，CO2流量为 50-150L/min 的条件下，萃取

h，在分离釜中分离出蛹虫草挥发油 ；再用蛹

虫草菌丝体粉质量 1-3 倍的酯类或酮类有机夹带剂继续萃取 1-3h 萃取分离出虫草素 ；再用蛹虫草菌丝体粉质量 1-3 倍的蒸馏水作为夹带剂，萃取1-3h，采用一级分离方式分离出含虫草酸和虫草多糖的水溶液。本发明降低了有机溶剂的使用，提高了生产效率，降低了生产成本。所得到的蛹虫草挥发油的提取得率为 6.5％左右，虫草素的提取率为 0.049％左右，虫草素的纯度为 45％左右，虫草酸的提取率为 2％左右。

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权

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一种从蛹虫草中连续提取虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖的工艺，其特征在于，包括以下步骤 ：

将过 40 ～ 60 目筛的蛹虫草菌丝体粉加入到超临界 CO2 流体萃取仪中 ；在压力15-25Mpa，温度 35-40℃，CO2 流量为 50-150L/min 的条件下，萃取 1-3h，在分离釜中分离出虫草挥发油 ；

用蛹虫草菌丝体粉质量 1-3 倍的酯类或酮类有机夹带剂，在压力为 22-30Mpa，温度为 35-40℃、CO2 流量为 50-150L/min 的条件下，继续萃取 1-3h，从分离釜中分离出含虫草素的有机夹带剂，在 55-65℃将该溶液进行减压蒸馏回收有机夹带剂，烧瓶中剩余物为虫草素产品，冷冻干燥得虫草素 ；

在原超临界 CO2 流体萃取仪中，用蛹虫草菌丝体粉质量 1-3 倍的蒸馏水作为夹带剂，在压力为 25-30Mpa，温度为 40-50℃的条件下，萃取 1-3h，采用一级分离方式分离出含虫草酸和虫草多糖的水溶液，往该溶液中加入虫草多糖溶液 4 倍体积的 95％的乙醇，产生絮状沉淀，低温放置 3-5h，沉淀完全后，在转速为 3000-4000 转/min 条件下离心 10-20min，得虫草多糖沉淀，经冷冻干燥，得虫草多糖产品 ；将离心上清液 60℃旋转减压浓缩回收乙醇，浓缩液为虫草酸浸膏，经冷冻干燥，得含虫草酸的产品。

根据权利要求 1 所述的从蛹虫草中连续提取虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖的工艺，其特征在于，所述酯类夹带剂是乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯。

根据权利要求 1 所述的从蛹虫草中连续提取虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖的工艺，其特征在于，所述酮类夹带剂是丙酮、甲乙酮。

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从蛹虫草中连续提取虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖的工艺

技术领域

[0001]本发明涉及一种超临界CO2 流体连续萃取蛹虫草中虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖的工艺。

背景技术

[0002]冬虫夏草是一类药用价值极高的珍稀名贵药材，含有众多活性成分，如虫草酸、虫草多糖、多种核苷类 ( 虫草素、脲苷、腺苷 )、挥发油、黄酮、甾醇类化合物、超氧化物歧化酶等。其中虫草多糖、虫草素、虫草酸的含量是评价虫草质量主要指标。其中的虫草素是一种核苷类抗生素，具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌和消炎、提高免疫力、抗白血病等多种生物活性。虫草多糖能调节人体免疫功能，增强抗病能力，具有抗癌活性，对各种疾病引起的白细胞降低有很好的辅助治疗作用，还具有降血糖的功能，同时冬虫夏草多糖能增强单核巨噬细胞功能，提高血清 IgG 水平，促进淋巴母细胞转化。虫草酸能抑制各种病菌的成长，可预防与治疗脑血栓、脑出血、心肌梗塞等疾病。但是从冬虫夏草中提取以上组份价格极贵。蛹虫草是冬虫夏草的重要人工替代品之一，其功能成分、药理药效作用与天然冬虫夏草基本一致，

200710122409.0 公开了一种从蛹虫草中提取精制虫草素和虫草多糖的方法，是将蛹虫草粉末以冷渗法提取过滤，滤渣与乙醇混合，超声波辅助提取、离心，上清液浓缩、醇析。醇析上清液减压浓缩、洗脱，洗脱液浓缩结晶，用正丁醇重结晶，得到虫草素 ；醇析沉淀进行酶解脱蛋白处理、离心，上清液浓缩、洗脱，流出液浓缩、醇析，冷冻干燥后得到精制多糖。这种方法提取虫草素和虫草多糖，提取率低，工艺复杂，只能提取出虫草素和虫草多糖 ；而不能连续提取出虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖，且其有机溶剂的使用量较高。

发明内容

[0003]本发明的目的在于提供一种可减少有机溶剂的用量，减少分离步骤，提高提取率、降低成本、能从蛹虫草中连续提取虫草精油、虫草素、虫草酸与虫草多糖的综合工艺。

[0004]本发明包括以下步骤 ：

[0005] (1) 将过 40 ～ 60 目筛的蛹虫草菌丝体粉加入到超临界CO2 流体萃取仪中 ；在压力15-25Mpa，温度 35-40℃，CO2 流量为 50-150L/min 的条件下，萃取 1-3h，在分离釜中分离出蛹虫草挥发油 ；

[0006](2) 用蛹虫草菌丝体粉质量 1-3 倍的酯类或酮类有机夹带剂，在压力为 22-30Mpa， 温度为 35-40℃、CO2 流量为 50-150L/min 的条件下，继续萃取 1-3h，从分离釜中分离出含虫草素的有机夹带剂，在 55-65℃将该溶液进行减压蒸馏回收有机夹带剂，烧瓶中剩余物为虫草素产品，冷冻干燥得虫草素 ；

[0007] (3) 在原超临界 CO2 流体萃取仪中，用蛹虫草菌丝体粉质量 1-3 倍的蒸馏水作为夹带剂，在压力为 25-30Mpa，温度为 40-50℃的条件下，萃取 1-3h，采用一级分离方式分离出含虫草酸和虫草多糖的水溶液，往该溶液中加入北虫草多糖溶液 4 倍体积的 95％的乙

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醇，产生絮状沉淀，低温放置 3-5h，沉淀完全后，在转速为 3000-4000 转 /min 条件下离心 10-20min，得虫草多糖沉淀，经冷冻干燥，得虫草多糖产品 ；将离心上清液 60℃旋转减压浓缩回收乙醇，浓缩液为虫草酸浸膏，经冷冻干燥，得含虫草酸的产品。

[0008]所述酯类夹带剂是乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯。

[0009]所述酮类夹带剂是丙酮、甲乙酮。

[0010]本发明能在保护活性成分生物活性的前提下，快速、高效地将蛹虫草中的虫草素、虫草酸、虫草多糖提取出来，简化了分离纯化的步骤，降低了有机溶剂的使用，提高了生产效率，降低了生产成本。所得到的蛹虫草挥发油的提取得率为 6.5％左右，虫草素的提取率为 0.049％左右，虫草素的纯度为 45％左右，虫草酸的提取率为 2％左右，虫草酸的纯度为

25％左右，虫草多糖的提取率为 6.8％左右，虫草多糖纯度为 45％左右。

具体实施方式

[0011] 实施例 1 ：

[0012]   (1) 取液体发酵的蛹虫草菌丝体，在真空箱中 60℃干燥 12h，于植物粉碎机中粉

碎，过 40 目筛，得蛹虫草菌丝体粉，准确称取 1kg 蛹虫草菌丝体粉，加入到萃取釜容积为 3 升的超临界CO2 流体萃取仪的萃取釜中，设置萃取压力 20Mpa 左右，萃取温度 37℃，CO2 流量为 80L/h，萃取时间 2h。从分离釜中得亮黄色透明的蛹虫草挥发油。

[0013] (2) 保持萃取釜中的蛹虫草菌粉不变，改变萃取条件为 ：萃取压力 25Mpa 左右，萃取温度 40℃，夹带剂为 2 升乙酸乙酯，CO2 流量为 50L/h，萃取时间 2h。从分离釜中得含虫草素的乙酸乙酯溶液。在 60℃下将该溶液进行减压蒸馏回收乙酸乙酯，烧瓶中剩余物为虫草素产品，冷冻干燥，产品质量约为 1g，虫草素含量为 42％左右。

[0014](3) 保持萃取釜中的蛹虫草菌粉不变，改变萃取压力为 25Mpa，萃取温度为 45℃，改用 2 升蒸馏水作为夹带剂，萃取 2h，采用一级分离方式分离，得到含虫草酸和虫草多糖水溶液，往该溶液中加入 4 倍虫草多糖水溶液体积的 95％的乙醇，产生絮状沉淀，低温放置

5h，沉淀完全后，4000 转 /min 转速离心 10min，得沉淀，沉淀冷冻干燥，得虫草多糖产品，产品质量约为 150g，虫草多糖纯度约为 45％。将离心上清液 60℃旋转减压浓缩回收乙醇，浓缩液为浸膏，冷冻干燥，得产品约为 80g，该产品含虫草酸，虫草酸含量约为 25％。

[0015]实施例 2 ：

[0016]   (1) 取人工固体栽培的蛹虫草子实体，在真空箱中 60℃干燥 12h，于植物粉碎机中粉碎，过 40 目筛，得蛹虫草子实体菌粉，准确称取 1kg 蛹虫草子实体菌粉，加入到 3L 的超临界CO2 流体萃取仪的萃取釜中，设置萃取压力 20Mpa 左右，萃取温度 40℃，CO2 流量为 120L/ h，萃取时间 2h。从分离釜中得亮黄色透明的蛹虫草挥发油。

[0017] (2) 保持萃取釜中的蛹虫草菌粉不变，改变萃取条件为 ：萃取压力 25Mpa 左右，萃取温度 40℃，夹带剂为 2 升乙酸乙酯，CO2 流量为 50L/h，萃取时间 2h。从分离釜中得含虫草酸的乙酸乙酯溶液。在 60℃下将该溶液进行减压蒸馏回收乙酸乙酯，烧瓶中剩余物为虫草酸产品，冷冻干燥，产品质量约为 1.1g，虫草素纯度约为 45％。

[0018](3) 保持萃取釜中的蛹虫草子实体菌粉不变，改变萃取压力为 30Mpa，萃取温度为

45℃，改用 2 升蒸馏水作为夹带剂，萃取 2h，采用一级分离方式分离，得到含虫草酸和虫草多糖水溶液，往该溶液中加入虫草多糖水溶液 4 倍体积的 95％的乙醇，产生絮状沉淀，低温

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放置 4h，沉淀完全后，4000 转 /min 转速离心 10min，得沉淀，沉淀冷冻干燥，得虫草多糖产品，产品质量约为 140g，虫草多糖纯度约为 50％。将离心上清液 60℃旋转减压浓缩回收乙醇，浓缩液为浸膏，冷冻干燥，得产品约为 70g，该产品含虫草酸，虫草酸含量约为 30％。